內(nèi)參是由管家基因編碼表達(dá)的蛋白，它們在各組織和細(xì)胞中表達(dá)相對恒定。主要用來校正蛋白質(zhì)定量、上樣過程中存在的誤差，從而保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。也可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個蛋白免疫印跡顯色發(fā)光體系是否正常。內(nèi)參抗體種類很多，常見的內(nèi)參抗體包括β-actin、β-tubulin、GAPDH等，那么我們該如何選擇合適的內(nèi)參抗體呢？

樣本種屬來源：

?      哺乳動物的組織或者細(xì)胞樣本通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、HistoneH3等

?      植物樣本則可以選擇actin、Rubisco等

?      研究者也需要參照文獻(xiàn)報導(dǎo)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參

目的蛋白表達(dá)部位：

?      全細(xì)胞蛋白檢測一般用GAPDH、β-actin、β-tubulin等抗體作為內(nèi)參。而針對于核蛋白的定量，特別是樣本蛋白就是核蛋白時，選擇恰當(dāng)?shù)暮说鞍變?nèi)參則更能體現(xiàn)內(nèi)部參照的價值。常用的核內(nèi)參抗體有Lamin A、Lamin B、Histone H3；除此之外，其它常見的核蛋白內(nèi)參還有PCNA、K70、K80等；在一些文獻(xiàn)報道中，ERK2、TATA binding protein (TBP) 以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而對于膜蛋白檢測，常用的內(nèi)參抗體為Na+ /K+-ATPase。

?      對于一些植物的樣本，則需要特別的植物Actin蛋白作為內(nèi)參。當(dāng)實驗樣品中只是核蛋白，而不是細(xì)胞總蛋白提取液時，可以用組蛋白H（Histone H），或者增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）等作為核內(nèi)參抗體。對于線粒體蛋白的檢測，常用COX IV或VDAC1作為內(nèi)參抗體，這里面COX IV又是被引用最多的線粒體內(nèi)參。對于葉綠體蛋白的檢測，常用Rubisco作為內(nèi)參。

目的蛋白大小：

選擇內(nèi)參抗體時應(yīng)考慮目的蛋白分子量大小，通常保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5kDA以上

蛋白表達(dá)要恒穩(wěn)：

挑選的內(nèi)參是否會受實驗變化影響。例如，GAPDH是常用的內(nèi)參，但在缺氧和糖尿病等疾病存在下，會增加GAPDH在特定細(xì)胞和組織中的表達(dá)，在代謝糖酵解的研究中就不適合作為內(nèi)參。


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